基于PCR的随机突变是阐述蛋白质的结构与功能关系和改进蛋白质性能的重要工具。易错 PCR(error-prone PCR)技术是在特定的 PCR 反应体系中,利用 Taq DNA Polymerase 不具有3′ → 5′ 校对功能的特性,可向目的基因中引入随机序列突变。本试剂盒在优化的体系下,通过调整加入 PCR 反应体系中 Mn2+ 和 dGTP 的浓度,利用 Mutation DNA Polymerase 可向目的基因中引入不同数量的碱基突变,增加在蛋白水平上产生氨基酸序列突变的可能性。将随机突变的扩增产物克隆到表达载体中构建基因文库,然后转入表达宿主中对蛋白进行活性筛选,使研究人员能够在结构信息缺乏的情况下,或者难以从蛋白质结构中预测有益突变的情况下,筛选出有益突变。
组分 | 规格 |
Mutation DNA Polymerase(1 U / μl) | 50 μl |
5X Mutation Buffer | 500 μl |
50X dNTP Mix(dGTP free) | 50 μl |
dNTP Mix(10 mM each)* | 50 μl |
dGTP Solution(2 mM) | 250 μl |
MnSO4 Solution(8 mM) | 200 μl |
*:标准 dNTP mix,dATP, dCTP, dGTP和dTTP的浓度均为 10 mM。
1. 可控的随机突变,可以通过改变反应条件以达到所需的随机突变水平。
2. 特异性好,本产品中添加了能够抑制 DNA 聚合酶活性的单克隆抗体,可以进行热启动反应。
3. 扩增性能强,在各个反应条件下扩增的 DNA 片段长度均可达到 4.1 kb。
4. 突变多样性,可产生转换(transition)和颠换(transversion)的点突变。
(注:转换突变包括嘌呤→嘌呤和嘧啶→嘧啶的变化,颠换突变是嘌呤↔嘧啶的变化。)
5. 扩增得到的 PCR 产物 3′ 端带有一个 A 碱基,可直接克隆于 T 载体。
保存温度:-20℃
运输温度:干冰运输或 -20℃ 冰袋运输